進口熒光顯微鏡是以紫外線為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。用于研究細胞內(nèi)物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。細胞中有些物質,如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
進口熒光顯微鏡技術包括免疫熒光技術和熒光素直接標記技術。例如,將標記熒光素的純化肌動蛋白顯微注射入培養(yǎng)細胞中,可以看到肌動蛋白分子組裝成肌動蛋白纖維??蓪a(chǎn)生熒光的綠色熒光蛋白基因與某種蛋白質基因融合,在表達這種融合蛋白的細胞中,便可直接在活體狀態(tài)下觀察到該蛋白在活細胞內(nèi)的動態(tài)變化。不同熒光素的激發(fā)波長范圍不同,所以同一樣品可以用兩種以上的熒光素標記,同時顯示不同成分在細胞中的定位。
進口熒光顯微鏡檢術一般分為透射和落射式兩種類型。
(1)透射式:激起光來自被檢物體的下方,聚光鏡為暗視界聚光鏡,使激起光不進入物鏡,而使熒光進入物鏡。它在低倍情況下亮堂,而高倍則暗,在油浸物鏡下較難操作,尤以低倍的照明規(guī)模難于確認,但能得到很暗的視界背景。透射式不適用于非透明的被檢物體。
(2)落射式:透射式目前簡直被淘汰,新型的進口熒光顯微鏡多為落射式,光源來自被檢物體的上方,在光路中具有分光鏡,所以對透明和不透明的被檢物體都適用。因為物鏡起了聚光鏡的效果,不只便于操作,并且從低倍到高倍,可以實現(xiàn)整個視場的均勻照明。